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 DH5α Chemically Competent Cell 使用說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品說(shuō)明：

本品為DH5α感受態(tài)細(xì)胞，缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，且為重組酶缺陷型（recA），有利于高純度質(zhì)粒DNA的提取，同時(shí)減少插入片段的同源重組概率，確保插入DNA的穩(wěn)定性，為質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、基因克隆提高保障。 lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)白斑篩選。DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×10⁸ cfu/μg。

 產(chǎn)品組成：

* 基因型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

儲(chǔ)存條件：

-80℃±10℃保存6個(gè)月。請(qǐng)勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

使用方法：

1.       將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。

2.       將目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）加入到100μL感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30分鐘。

3.       42℃水浴熱激45秒后，立刻置于冰上，靜置2～3分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

4.       向離心管中加入200μL無(wú)抗LB、TB或SOC培養(yǎng)基，混勻后于220rpm，37℃搖床振蕩復(fù)蘇60分鐘，使轉(zhuǎn)化物表達(dá)抗性基因。

5.       根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求吸取適量菌液，涂布至相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上，室溫正置10分鐘，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜。

注意事項(xiàng)：

1.       感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目的DNA，不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2.       待轉(zhuǎn)化DNA加入體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

3.       待轉(zhuǎn)化DNA加入感受態(tài)細(xì)胞后，請(qǐng)勿用移液槍吹打，輕輕彈勻即可。

4.       為確保最高效率轉(zhuǎn)化，整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔，并保持冰上操作。

DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)

北京畢特博生物技術(shù)有限責(zé)任公司

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