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        生物知識(shí)

        血清滅活嗎?不用浪費(fèi)時(shí)間了!

        作者:admin 來(lái)源:本站 發(fā)布時(shí)間: 2019-03-23 14:28  瀏覽次數(shù):
        購(gòu)買進(jìn)口儀器、試劑和耗材——就在始于2001年的畢特博生物 effectnews.cn

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        這個(gè)”血清熱滅活”的場(chǎng)景很熟悉嗎?

        你有可能在浪費(fèi)時(shí)間!

         

         

        血清熱滅活非必要
          血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,至今成為很多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)血清前處理步驟;但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因,卻早已經(jīng)不再成立:

         

         

        • 去除支原體污染?
          早期血清加工使用的450nm濾膜,早已被100nm濾膜取代;且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控,血清產(chǎn)品早已沒(méi)有支原體污染的疑慮。

        • 去除補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)? 
          胎牛血清中含有的補(bǔ)體僅為成年牛血清5-50%,而C3 (補(bǔ)體中引起免疫反應(yīng)的主成分)在胎牛血清中則幾乎不能檢出,直接使用血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞株沒(méi)有負(fù)面影響。


                                                                       
           血清熱滅活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯幫助  

          細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對(duì)各種細(xì)胞株的生長(zhǎng)能力影響,發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中,熱滅活對(duì)6 株細(xì)胞有負(fù)面影響(紅)、3株無(wú)影響(綠)、2株有微弱正面改善(黃)(下圖1)。


         

         

                                                                        ▲圖1:使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。

         

          所以,在正常操作下,熱滅活通常對(duì)“細(xì)胞生長(zhǎng)”沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用,反而會(huì)破壞血清內(nèi)生長(zhǎng)因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),降低細(xì)胞增殖速度。

                                                                          血清熱滅活的缺點(diǎn)

         

          萬(wàn)一小艾設(shè)錯(cuò)水浴溫度或忘記按計(jì)時(shí)器,都會(huì)導(dǎo)致過(guò)高的加熱溫度(下圖2)或過(guò)長(zhǎng)的加熱時(shí)間(下圖3),進(jìn)而大大降低血清的功能,影響細(xì)胞生長(zhǎng)的表現(xiàn)。

                                                   

                                                              ▲圖2:過(guò)高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長(zhǎng)速度(僅一株未受明顯影響)。

                                                  

                                                             ▲圖3:過(guò)長(zhǎng)的加熱時(shí)間降低大多細(xì)胞株生長(zhǎng)速度(僅一株未受明顯影響)。

           且滅活加熱過(guò)程會(huì)增加血清的沉淀狀況,而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,進(jìn)而耗費(fèi)大量時(shí)間及精力驗(yàn)證是否污染,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)一再拖延。

                                                    我的細(xì)胞一定要用滅活血清怎么辦?

         

          在滅活過(guò)程中,除了需要嚴(yán)格監(jiān)測(cè)加熱溫度認(rèn)真計(jì)算時(shí)間,還有幾個(gè)小技巧可以注意噢!

          

         

        • 滅活時(shí),水浴槽水面與血清液面等高。
            
            使用水浴槽時(shí),大多數(shù)人為避免血清瓶浮起來(lái),會(huì)減少水浴槽內(nèi)的水量,讓水面降低;數(shù)據(jù)顯示,降低水面也會(huì)使瓶?jī)?nèi)加熱不均、拉長(zhǎng)加熱時(shí)間(下圖4),增加血清破壞程度;所以還是建議將水浴槽內(nèi)水量增加,讓水面與血清液面等高,讓血清最大面積的接觸水流,增加滅活效率!

          ▲圖4:300ml刻度水位需要60分鐘加溫;500ml刻度水位僅需40分鐘加溫。

            至于血清瓶漂浮的問(wèn)題,套上燒瓶用鉛環(huán)(下圖5)就解決啦!


          ▲圖5:燒瓶用鉛環(huán)。

          • 滅活后,使用冷水浴降溫!  

            滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻,僅靠空氣傳導(dǎo)散熱,冷卻效果差(下圖6),使得實(shí)際加熱時(shí)間拉長(zhǎng),對(duì)血清的影響較大;反之,流動(dòng)的冷水浴散熱速度較快,冷卻效果佳,縮短降溫時(shí)間的同時(shí),也減少對(duì)血清的破壞。


        • ▲圖6:比較冷水浴及4℃冰箱降溫速度。

         

        養(yǎng)細(xì)胞的各位
        是不是該重新檢視

        自己的實(shí)驗(yàn)步驟了呢?

         

         

        本文重點(diǎn)

         

        1. 現(xiàn)代血清加工技術(shù)進(jìn)步,熱滅活已成為非必要步驟。

        2. 熱滅活對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有明顯促進(jìn)作用,反而會(huì)破壞血清、增加沉淀狀況。

        3. 除非文獻(xiàn)指出該細(xì)胞必須使用滅活血清,一般細(xì)胞培養(yǎng)可省略血清熱滅活步驟。

        4. 如果必須使用滅活血清,加熱時(shí)水浴槽水面高度盡量與血清液面等高;滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫,能最大程度減少對(duì)血清的破壞。直接選擇購(gòu)買已滅活的血清產(chǎn)品,也是個(gè)好選擇噢!

         

         

         

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