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當(dāng)培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)，重要的是要記住，他們不是細(xì)胞系，不能同等對(duì)待。這里有六個(gè)在原代細(xì)胞培養(yǎng)中的常見錯(cuò)誤，以及如何糾正這些錯(cuò)誤。供大家參考。
錯(cuò)誤1：一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間 糾正1：原代細(xì)胞對(duì)解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺(tái)。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。
錯(cuò)誤2：解凍match小瓶后直接離心原代細(xì)胞 糾正2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。
錯(cuò)誤3：允許原代細(xì)胞變得過于融合 糾正3：當(dāng)生長(zhǎng)至100％匯合時(shí)，原代細(xì)胞可以變得衰老。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長(zhǎng)。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時(shí)，對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
錯(cuò)誤4：傳代原代細(xì)胞時(shí)過度胰蛋白酶消化 糾正4：當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。
錯(cuò)誤5：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存 糾正5：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。
錯(cuò)誤6：原代細(xì)胞可以無限的增殖
糾正6：與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。
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