本人現(xiàn)在在做酵母雙雜，將AD和BK的載體導(dǎo)入后，在二缺板上長(zhǎng)了，然后想在二缺液中搖起來(lái)點(diǎn)四缺板，但是酵母聚集成了球狀，不是分散的，有哪位見(jiàn)過(guò)這種情況？？急求
建議參考德國(guó)的酵母雙雜交系統(tǒng)
特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：
1. 可以篩選不同蛋白-蛋白之間相互作用的強(qiáng)度；
2. 利用銅誘導(dǎo)的CUP1/ACE1系統(tǒng)能更有效的檢測(cè)體內(nèi)蛋白相互作用；
3. 利用銅抗性這種嚴(yán)格的篩選，會(huì)出現(xiàn)很少的假陽(yáng)性；
4. 利用GFP這種綠色熒光蛋白的報(bào)告基因，篩選陽(yáng)性菌株可以節(jié)省大量的時(shí)間；
5. 篩選陽(yáng)性菌株不需要外部酶底物，如X-Gal；
6. 適合高通量的篩選分析。
產(chǎn)品介紹：
酵母雙雜交系統(tǒng)是一種用于篩選體內(nèi)蛋白-蛋白之間相互作用的方法，它依賴于DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和DNA激活結(jié)構(gòu)域的分離，并將這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域基因分別與兩個(gè)蛋白基因融合在一起，如果兩種蛋白能夠相互作用，就會(huì)使這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域重組成一個(gè)有活性的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物，這樣，就會(huì)使報(bào)告基因得以表達(dá)。
MoBiTec的ACE1雙雜交系統(tǒng)是一個(gè)強(qiáng)大的工具，它可以用于新基因的發(fā)現(xiàn)和功能分析，而且可以有效的鑒別體內(nèi)蛋白-蛋白的作用。它將銅誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子ACE1和銅抗性CUP1基因與作為報(bào)告基因綠色熒光蛋白GFP基因結(jié)合起來(lái)。兩種相互作用的蛋白分別與ACE1的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和DNA激活結(jié)構(gòu)域相融合，從而使我們可以通過(guò)下面的方法篩選：1.在含銅的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)胞；2.依賴銅表達(dá)的強(qiáng)熒光GFP可以通過(guò)紫外光檢測(cè)到。
因此，這種新技術(shù)，可以很有效的通過(guò)一步法篩選可能的陽(yáng)性表達(dá)，即在含有銅的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并發(fā)出綠色熒光的菌株。它是一種快速、高靈敏度和更值得信賴的檢測(cè)方法。不斷改變銅濃度還可以篩選出不同蛋白之間相互作用的強(qiáng)度。
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http://effectnews.cn/a/gb2312/product/MoBiTec/2010/0913/3651.html |
