作者：周曄,張莉 作者單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院崇明分院,上海 崇明 202150) 來源：醫(yī)學期刊
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【摘要】
目的：對用ELISA法檢測乙肝表面抗原產(chǎn)生“假陽性”進行分析及找出解決的方法。方法：用不同的轉(zhuǎn)速和時間對同一批標本進行離心，再用ELISA法檢測乙肝表面抗原。結果：同一批標本通過增加標本的離心時間和提高離心速度使假陽性結果減少。結論：離心是乙肝表面抗原產(chǎn)生“假陽性”主要影響因素。
【關鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)夾心法 乙肝表面抗原 假陽性 離心
Purpose to the Method that Carries on Analysis and Finds Out to Solve withthe ELISA Examination HBsAg Creation “False Positive”
ZHOU Ye,ZHANG Li
(Chongming Branch of Renji Hospital,Shanghai Traffic University,Chongming,Shanghai 202150,China)
Abstract: Objective Purpose to the method that carries on analysis and finds out to solve with the ELISA method examination HBsAg creation“false positive”.Methods By using to turn differently to carry on centrifugence to the same batch of specimen with time soon,and then sing ELISA examination HBsAg. Results By increasing time and rotate speed can make the false male result reduced. Conclusion Centrifugence is the main influence factor which creates “false positive”.
Key words: ELISA;HBsAg;False positive;Centrifugence
乙型肝炎在我國的發(fā)病率很高，是當前嚴重危害人們身體健康的傳染病之一。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙肝的感染指標之一，因此，HBsAg的檢查往往是體檢的項目之一，對乙肝的預防和治療具有重要的意義。檢測乙肝表面抗原，常采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)夾心法以及膠體金免疫層析法(GICA)。ELISA具有操作簡單、技術可靠、試劑方便易得等優(yōu)點，特別是20世紀90年代以來ELISA的靈敏度和特異性都得到了顯著的提高，所以盡管檢測HBsAg的新技術如PCR、化學發(fā)光法、電化學發(fā)光法及時間分辨免疫熒光法等不斷地被建立和應用，ELISA作為一項成熟的檢測技術仍有較大的應用價值。故本科室以ELISA為主檢測HBsAg，GICA則作為體檢篩選檢測。在使用ELISA HBsAg試劑進行血標本檢測時經(jīng)常發(fā)現(xiàn)有數(shù)孔出現(xiàn)弱陽性的情況，上海市臨床檢驗質(zhì)控中心規(guī)定0.073 5≤OD值≤0.210都要重新檢測，第2天重新檢測后陽性率降低。經(jīng)過仔細的分析、研究和多次的試驗發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生假陽性的原因，并找到了解決的方法。
1 材料與方法
1.1 材料
體檢人員的標本共180份。
1.2 試劑與儀器
HBsAgELISA試劑盒(上海實業(yè)科華公司)；全自動洗板機(美國寶特ELX-50型);全自動酶標測定儀(美國寶特ELX-800型)。
1.3 方法
抽取靜脈血，用北京產(chǎn)LDZ5-2離心機離心取血清標本。離心結束后，試驗嚴格按照HBsAg檢測的 SOP要求進行檢測。離心程序有4個：(1)轉(zhuǎn)速1 000 rpm，時間5 min；(2)轉(zhuǎn)速2 000 rpm，時間5 min；(3)轉(zhuǎn)速3 000 rpm，時間15 min；(4)轉(zhuǎn)速3 000 rpm，時間30 min?！ ?/p>
2 結果
180份標本檢測結果(見表1)。表1 180份血標本HBsAg檢測結果[份(略)]注：與程序#比較，*P<0.05，**P<0.01，#P>0.05。
3 討論
ELISA檢測中受到許多因素的影響, 如檢測時間、血細胞[3]、加樣量、洗板方式[4]、血清分離等。通過對180份標本檢測結果的分析比較，發(fā)現(xiàn)試劑的空白和陰、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔OD值都很正常，只有血液標本孔OD值的情況異常，原因在于標本的離心和血液的放置時間上。留取檢驗標本之前，先用金標試劑的檢測，檢測的結果全為陰性，在HBsAg的ELISA檢測中，標本的陽性率不應該很高[3]。筆者通過增加標本的離心時間和提高離心速度解決了影響試驗的關鍵問題。試驗結論，把標本徹底離心分離不溶血，就可得到準確的實驗結果。這說明，標本的離心處理好壞直接影響實驗結果的準確性。血標本影響ELISA法HBsAg檢測結果的主要原因有[4]：(1)血清中的補體可與IgG的Fc段結合，可造成假陽性。(2)血漿中纖維蛋白原和酶結合物一起易粘附到ELISA檢測板上不易洗掉，可造成假陽性。(3)血清中若有類風濕因子(RF)，RF可與抗體結合，造成假陽性。(4)免疫球蛋白聚合物、免疫復合物易吸附于塑料表面，可造成非特異性吸附，導致假陽性。為了避免ELISA試劑“檢測時假陽性的出現(xiàn)”，為了降低檢測的假陽性率，取得準確的結果，筆者認為可采取下列措施：(1)試劑盒在使用前平衡至室溫。(2)使用抗凝血標本。(3)溶血標本不能檢驗，應重新抽血[1,2]。(4)冬天抽血后最好放置溫水浴中2小時凝塊收縮后再行離心檢測。(5)離心標本檢測之前，要加大離心速度(3 000 rpm)，增加離心時間，增加離心時間15 min使紅細胞和纖維蛋白完全沉淀、離心完全。(6)標本放置10 h后再檢測較好，讓血凝塊更好地收縮，讓標本中的非特異性活性物質(zhì)部分或全部失活，降低非特異性反應所致的假陽性率但需要時間較長。通過以上措施，可降低ELISA法HBsAg檢測的假陽性率,獲取理想的實驗結果。
【參考文獻】
[1] 黃秋芳,王 微,李 永.ELISA檢測HBsAg復檢結果的分析[J].檢驗醫(yī)學,2004,19(4):603.
[2] 陳傳德,冷 霜.ELISA一步法檢測HBsAg影響因素分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2003,13(3):853.
[3] 施紀文, 徐簡華, 溫惠萍. ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原的比較[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2005,20 (5):48-49.
[4] 邢培清, 劉玉振. 實用輸血檢驗 [M].鄭州:鄭州大學出版社,2001:95-145.
（收稿日期：2008-06-27）
作者簡介：周 曄(1973-)，女，上海人，主管技師。
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